产品目录

本试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特溶液系统，适合从含酚类、多糖类和酶抑制物的植物样品中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的植物样品DNA的纯化工作。提取过程不需用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的植物组织(细胞)磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤，进一步将多糖，多酚和细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

• 离心吸附柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
  
• 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
  
• 快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
  
• 所得DNA纯度高，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。

• 裂解液AP1、AP3/E低温时可能出现析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重新溶解(AP3加入乙醇前可加热，加入乙醇后不可加热)，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

• 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。
  
• 开始实验前将需要的水浴先预热到65℃备用。
  
• 缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
  
• 不同组织提取DNA的量会有差异，一般100mg新鲜组织典型产量可达3～25μg。
  
• 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

• 取新鲜组织100mg/干重组织20mg在研钵中加液氮充分磨成细粉。研磨前，备一个1.5mL离心管，加入400μL缓冲液AP1和4μL RNase A(10mg/mL)室温备用。
  
• 转移细粉(新鲜组织100mg或干重组织20mg)到前面准备的1.5mL离心管(已加入400μL缓冲液AP1和4μL RNase A)，旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。
  如果组织裂解困难，可根据需要加一个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。大多数情况下不需要离心去除未完全裂解的组织，因为后面有一个离心去除的步骤。
  
• 65℃水浴10min，在水浴过程中颠倒离心管2～3次，混合样品。
  
• 加入130μL缓冲液AP2，充分混匀，冰上放置5min,14000rpm离心5～10min，小心吸取上清到一个新的1.5mL离心管，注意不要吸到界面物质。
  
• 计算上清量，加入1.5倍体积的AP3/E(确认已加入无水乙醇)，立即吹打混匀。加入AP3/E可能会出现絮状沉淀，但不影响DNA提取。注意将AP3/E直接加入到上清并立即吹打混匀。
  
• 将上一步所得混合物(包括可能出现的沉淀)加入另一个吸附柱AC中，(吸附柱放入收集管中)13000rpm离心30～60秒，倒掉收集管中的废液(先加650μL离心，弃废液，再加入剩余的溶液，再次离心)。
  
• 加入600μL漂洗液WB(确认已加无水乙醇),12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 加入600μL漂洗液WB,12000rpm离心30秒，弃掉废液。
  
• 将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱AC，放入一个干净离心管中，在吸附膜中间部位加100μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液可先在65～70℃水浴中预热)，室温放置3～5min,12000rpm离心1min。将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2min,12000rpm离心1min。
  洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果预计和需要产量高，可增大洗脱体积，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
  
• DNA可以存放在2～8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

• DNA产量低
  
  • 处理材料过量或者裂解不完全
    建议：使用适量的起始材料，充分研磨或者匀浆
    
  • 结合条件不恰当
    建议：步骤5精确估计上清量，加入1.5倍体积AP3/E量要准确
• RNA残留植物RNA含量太丰富
  建议：提高RNase A处理浓度
  
• 未提取到DNA
  
  • 漂洗液WB中忘记加无水乙醇。
    建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇。
• 离心柱堵塞。
  
  • 研磨裂解不充分，团块多；裂解物太粘稠；离心力太小。
    建议：参见步骤2，加一个离心步骤去除；减低起始材料量，不要处理过量，加大离心力。
• 洗脱下来的DNA溶液带颜色或者膜上有明显的色素残留。
  
  • 漂洗次数不够。
    建议：步骤8完成后，加500μL乙醇再漂洗一遍。
    
  • 起始材料太多过量。
    建议：减少起始处理材料，不要过量
• 洗脱下来的DNA产量低。
  
  • 离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇。
    建议：确保做了步骤9，否则残留乙醇会影响洗脱效率。
    
  • 使用了水或者其它非最佳液体代替洗脱缓冲液
    建议：仔细阅读步骤10和注意事项5和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。
    
  • 洗脱缓冲液量偏低。
    建议：使用200μL洗脱缓冲液洗脱
• A260吸光值异常偏高。
  
  • 一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了吸光值。
    建议：将洗脱的基因组DNA溶液13000rpm再离心1min，小心取上清使用。
• DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全。
  
  • 一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应。
    建议：将洗脱的基因组DNA溶液13000rpm再离心1min，小心取上清使用。
    
  • 离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应。
    建议：确保做了步骤9，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。